核酸提取磁性微球提取純化的方法

更新時(shí)間：2022-09-01

技術(shù)文章

　　核酸提取磁性微球通過對(duì)磁珠進(jìn)行一定的包被（如硅基、氨基、羧基等），從而可以實(shí)現(xiàn)對(duì)核酸的高通量、自動(dòng)化提取。磁珠是一類特殊的納微米材料，它們的尺寸通常在零點(diǎn)幾微米到幾微米之間，僅為一根頭發(fā)絲直徑的十幾分之一到幾十分之一，肉眼是無法觀測(cè)到單個(gè)磁珠的。它們具有超順磁性，在磁場(chǎng)中可以向一側(cè)迅速移動(dòng)，聚集在一起，而去除磁場(chǎng)后又能夠迅速恢復(fù)到分散狀態(tài)。

　　核酸提取磁性微球提取純化的方法：

　　1、酚/氯仿抽提法

　　通過酚/氯仿處理細(xì)胞破碎液或者組織勻漿后，在水相中主要溶解以DNA為主的核酸成分，在有機(jī)相中主要是脂類物質(zhì)，蛋白質(zhì)位于兩相之間。

　　2、醇沉淀法

　　乙醇能夠消除核酸的水化層，使帶負(fù)電荷的磷酸基團(tuán)暴露出來，NA﹢等帶正電荷離子能與磷酸基團(tuán)結(jié)合，形成沉淀。

　　3、層析柱法

　　通過特殊硅基質(zhì)吸附材料，能夠特定吸附DNA，而RNA和蛋白質(zhì)順利通過，然后利用高鹽低PH結(jié)合核酸，低鹽高PH值洗脫，來分離純化核酸。

　　4、熱裂解堿法

　　堿法提取主要是利用共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒與線性染色質(zhì)在拓?fù)鋵W(xué)上的差異來分離他們，在堿性下，變性蛋白是可溶的。

　　5、煮沸裂解法

　　加熱處理DNA溶液，利用線性DNA分子的特性，通過離心將DNA片段與變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片形成的沉淀分離。

　　6、納米磁珠法

　　運(yùn)用納米技術(shù)對(duì)超順磁性納米顆粒的表面進(jìn)行改良和表面修飾后，制備成超順磁性氧化硅納米磁珠。該磁珠能在微觀界面上與核酸分子特異性地識(shí)別和高效結(jié)合。利用氧化硅納米微球的超順磁性，在Chaotropic鹽(鹽酸胍、異硫氰酸胍等)和外加磁場(chǎng)的作用下，從血液、動(dòng)物組織、食品、病原微生物等樣本中分離出DNA和RNA。

　　7、其他方法

　　除了上述常用的方法之外，還有超聲法、反復(fù)凍融法、酶解法及低滲裂解等等多種方法。

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